1.1 試驗(yàn)材料

瓜葉菊采自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)設(shè)施園藝中心。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的選取及處理

選擇健康植株，分別選取幼嫩的葉片，葉柄、莖段作為外植體，先用漂白粉洗凈表面，再用清水沖洗20～40min直至干凈，然后用濾紙把外植體表面的水吸干，在超凈工作臺(tái)上用70％酒精浸泡10s，無(wú)菌水沖凈，然后在2％NaCLO3溶液中浸泡5min，無(wú)菌水沖洗5～7次，備用。

1.2.2 瓜葉菊初代培養(yǎng)

將滅菌后的外植體接入初代培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)萌發(fā)和分化，之后將其放入人工氣候培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)?？疾?種激素及其濃度對(duì)瓜葉菊的葉片、葉柄及莖段進(jìn)行誘導(dǎo)的影響(表1)，篩選出 很佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.2.3 繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)中分化的小植株切割下來(lái)，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。首先將培養(yǎng)材料從培養(yǎng)瓶中取出，去除老化組織，進(jìn)行分割。把較大的植株進(jìn)行分割接入繼代培養(yǎng)基中，繼續(xù)放入人工氣候培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。反復(fù)進(jìn)行繼代，繼代周期為25d，可得到大量的完整植株。

1.2.4 生根培養(yǎng)

當(dāng)經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的叢生芽長(zhǎng)到2～3cm并出現(xiàn)5～7片真葉時(shí)，將其分割成單苗，然后分別轉(zhuǎn)入MS和1/2MS生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10d后觀察生長(zhǎng)狀況。

1.2.5 組培苗的煉苗及移栽

當(dāng)根長(zhǎng)到3cm以上，葉柄長(zhǎng)到3～4cm時(shí)，采用閉口全光照煉苗。經(jīng)7d后，打開(kāi)瓶蓋，進(jìn)行開(kāi)口煉苗，并按時(shí)旋轉(zhuǎn)封口膜，2d后，將封口膜取下并向三角瓶?jī)?nèi)注入少量蒸餾水，放于通風(fēng)處。7d后，取出組培苗，將根系所粘附的培養(yǎng)基用溫水洗凈，再在殺菌劑中浸泡一下，移栽到盛有基質(zhì)的培養(yǎng)缽中，基質(zhì)為高壓滅菌處理的草炭土，放入溫室內(nèi)進(jìn)行常規(guī)管理。

2.1 外植體的刪選及初代培養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，分別采用了瓜葉菊的葉片(圖1-A)、莖段、葉柄作為外植體，在相同條件下進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)的試驗(yàn)。在培養(yǎng)過(guò)程中，可以發(fā)現(xiàn)葉片經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)先生長(zhǎng)出大量愈傷組織(見(jiàn)圖1-B)，再分化出大量叢生芽，增值系數(shù)達(dá)到4左右，且生長(zhǎng)健壯。經(jīng)過(guò)50d 的培養(yǎng)后，從正交試驗(yàn)的結(jié)果分析中可以得出 很優(yōu)外植體為葉片(表2)。

按照L9(34)正交試驗(yàn)方案進(jìn)行組織培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)50d誘導(dǎo)培養(yǎng)后，統(tǒng)計(jì)其誘導(dǎo)率(表3)。對(duì)瓜葉菊初代培養(yǎng)的結(jié)果從表2和表3的分析可知，正交表中 很好的方案為3號(hào)試驗(yàn)，與優(yōu)方案組合A1，B3，C3，D3，一致?？梢缘贸觯汗先~菊初代培養(yǎng)的 很佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為A1，B3，C3，D3，即葉片+MS+NAA1.0mg/L+KT0.2mg/L+6-BA2.4mg/L。

2.2 繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)出來(lái)的叢生芽切割分離成單芽，接入相同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，對(duì)外植體繼續(xù)進(jìn)行誘導(dǎo)萌發(fā)及分化。由圖(1-D，E)可見(jiàn)，繼代培養(yǎng)基中外植體分化良好，能夠形成大量的根和叢生芽。

2.3 生根培養(yǎng)

繼代苗在1/2MS培養(yǎng)基中生根效果 很好，生根率達(dá)90％以上。培養(yǎng)10d后幼苗基部愈傷組織膨大，有呈乳白色的細(xì)根長(zhǎng)出。培養(yǎng)25d左右，幼苗高達(dá)4～5cm，根數(shù)長(zhǎng)到10條以上(圖1一E)，即可進(jìn)行煉苗與移栽。

2.4 煉苗及移栽

煉苗7d后，試管苗顏色嫩綠，生長(zhǎng)健壯，即可進(jìn)行換盆移栽，成活率達(dá)80％以上(圖l—F)。移栽前要進(jìn)行透氣訓(xùn)練，并用少量無(wú)菌水澆灌。移栽時(shí)將組培苗根系所粘附的培養(yǎng)基沖洗干凈．以防滋生細(xì)菌導(dǎo)致幼苗根部腐爛。

3.1 外植體滅菌時(shí)間及溶液濃度的探討

外植體必須進(jìn)行滅菌處理，否則，接入培養(yǎng)基后會(huì)染菌導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。外植體不同，滅菌時(shí)間及溶液的濃度也不同。幼嫩葉片、葉柄都比較脆弱，易被高濃度溶液殺死，喪失活性，所以滅菌時(shí)間稍短，溶液濃度也較低，這與張永樂(lè)等人（1999)的結(jié)論一致；莖段可根據(jù)情況適當(dāng)調(diào)整。

3.2 很佳外植體及誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方的選取

外植體的選取是決定體細(xì)胞無(wú)性系再生體系建立能否成功的關(guān)鍵因素。有關(guān)瓜葉菊組織培養(yǎng)的報(bào)道很多， 很早進(jìn)行研究的是張永樂(lè)(1999)以葉片、莖段為外植體，效果較好；何少波(2003)以葉片、葉柄和芽作為外植體，結(jié)論以芽作為外植體較適宜；于曉英(2004)以單芽莖段為外植體，認(rèn)為莖段為 很佳外植體。本實(shí)驗(yàn)以葉片、葉柄和莖段分別作為外植體，通過(guò)L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行篩選，表3可以看出葉片作為外植體誘導(dǎo)效果 很好。同時(shí)也可得出 很佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+NAA1.0mg/L+KT0.2mg/L+6-BA2.4mg/L，這與上述實(shí)驗(yàn)中得到的適宜培養(yǎng)基配方有一些差異，可能是由于地理位置及環(huán)境差異造成的，也可能是取材部位及時(shí)間不同引起的，至于其他的原因還有待進(jìn)一步研究。

編者按：本文來(lái)自張啟翔主編《中國(guó)觀賞園藝研究進(jìn)展》，中國(guó)林業(yè)出版社，由小編整理發(fā)布，如有不妥，敬請(qǐng)告知！